转印电泳的一抗和二抗
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一抗孵育：将LG用稀释液稀释到适当的浓，在摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，可以适当降低一抗稀释度或者延长一抗孵育时间）
洗膜：用PBST或者TBST洗膜5 X 5min，如果预实验中发现背景过高，可以增加洗膜时间或洗膜次数
二抗孵育：二抗是辣根过氧化物酶(HRP)标记的LG，蛋白电泳槽， 摇床上孵育2h（如果做过预实验后发现条带较淡，可适当降低延长二抗孵育时间）
洗膜：用PBST或者TBST洗膜3 X 10min
T：Tween-20（去污剂）
电泳槽内不导电
电泳槽内无电流（铂金电极上无气泡）
1、首先利用万用表检查电泳电源有无输出电压（注意选择直流电压挡，输出不得超过量程，以免损坏万用表）。
2、利用万用表电阻挡检查电泳槽导线是否导通。
3、利用万用表电阻挡检查电泳槽电极头与铂金丝之间是否导通，重点检查电极头是否与连接铂金丝的焊片紧密连接，如发现松动请使用尖嘴钳将其紧固即可，完毕后再进行检测，电泳槽，若还没有电流通过则检查铂金丝是否断裂，若铂金丝有断裂迹象则需要和生产厂家的售后服务部门联系，由厂家负责处理，一般需要对铂金丝进行更换处理。
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蛋白电泳中经常出现的问题和解决方法
1：“微笑”(两边翘起中间凹下)形带，小型转印电泳槽，主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所
致，电泳槽供应商，多出现于较厚的凝胶中。 处理办法：待其充分凝固再作后续实验。
2： “皱眉”(两边向下中间鼓起)形带
主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。
处理办法：在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。
3：出现拖尾现象?
主要是样品融解效果不佳、样品降解或分离胶浓度过大引起的。
处理办法：加样前离心;选择适当的样品缓冲液；电泳缓冲液时间过长，重新配制
4：电泳的条带很粗?
电泳中条带很粗是常见的事，主要是未浓缩的原因。
处理办法：适当增加浓缩胶的长度; 保证浓缩 胶贮液的pH正确(6.7);适当降低电压
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