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蛋白凝胶电泳的分类


蛋白凝胶电泳分为非变性凝胶和变性凝胶

所谓非变性凝胶,即在凝胶中不加SDS和尿素等变性剂,这种凝胶中,蛋白质仍保持活性,其迁移率受它的静电荷与分子大小两个因素的影响。
因此在非变性凝胶中进行电泳是不能测得分子量的,SDS PAGE电泳槽公司,常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。

所谓变性凝胶,即在凝胶中加入变性剂,如尿素、SDS(十二烷基磺酸钠)、DTT等。
这些变性剂可以破坏或改变蛋白质的结构,把绝大部分蛋白质分离成组成它们的亚基。
同时在蛋白质分子周围包围了大量负电荷。
这种电荷基本上掩盖了无变性剂存在时正常就有的任何电荷。
蛋白质在这种变性凝胶中的迁移率与它们分子量的对数成直线关系。
因此利用变性凝胶进行电泳可以测得蛋白质的分子量。
目前应用较多的变性剂为SDS。

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什么是电泳

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分子生物学中,电泳是应用广泛的技术,从首代基因测序技术的发明,到各种DNA分子以及蛋白质的分离、鉴定,无不用到了电泳。

顾名思义,电泳就是在某种介质中,SDS PAGE电泳槽,通过电流使物质像游泳一样移动,在生物学对电泳的明确定义是带电粒子在电场的作用下,向相反的电极移动,并利用带电粒子在电场中迁移速度不同以达到分离目的的技术。
简单来说,SDS PAGE电泳槽哪家好,电泳就是将DNA或蛋白质在电场中通过介质的分子筛效应将不同分子量的分子进行分离的技术。

电泳用琼脂糖多为粉状物,不带电荷,SDS PAGE电泳槽批发,凝点30°C,略高于室温,使用时需现用现配,溶质需和电泳时所使用的电泳缓冲液液一致;配置琼脂糖凝胶时,会有专门的制胶板(图1)和梳子(图2,用来预留点样孔)来制作凝胶块,配置凝胶时会加入荧光染料(部分荧光染料会有微毒,使用时应小心谨慎!),免去电泳后染色的步骤。



蛋白电泳

我们通常把“蛋白电泳”俗称为跑胶,如果按照这个字面意思来理解的话就是把蛋白质放在胶上跑,为啥要让蛋白质在胶上跑呢?我们提到的蛋白是总蛋白,也就是说细胞里所有(理论上)蛋白都在里头了,但是我们要检测的只是其中的一两种,所以我们得想办法把各种蛋白质分离开,借助的方法就是跑胶。
与核酸电泳一样,蛋白质电泳也需要marker和loading buffer。
与核酸电泳不一样的是,蛋白电泳(做WB时)的marker本身就是带有颜色的,在电泳过程中,我们可以清楚地看到marker上的每一个条带的位置,而核酸电泳的过程中我们是看不到marker的每一条带的,只有把胶经过核酸染料染色后,并且在紫外光下我们才能看到marker的条带。

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