蛋白电泳中经常出现的问题和解决方法
1:“微笑”(两边翘起中间凹下)形带,主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所
致,多出现于较厚的凝胶中。 处理办法:待其充分凝固再作后续实验。
2: “皱眉”(两边向下中间鼓起)形带
主要出现在蛋白质垂直电泳槽中,一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。
处理办法:在两板间加入适量缓冲液,以排除气泡。
3:出现拖尾现象?
主要是样品融解效果不佳、样品降解或分离胶浓度过大引起的。
处理办法:加样前离心;选择适当的样品缓冲液;电泳缓冲液时间过长,转印电泳槽哪家好,重新配制
4:电泳的条带很粗?
电泳中条带很粗是常见的事,主要是未浓缩的原因。
处理办法:适当增加浓缩胶的长度; 保证浓缩 胶贮液的pH正确(6.7);适当降低电压
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电泳槽配置
电泳槽配置
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电泳槽一般分为三部分:1,电泳槽外壳;2,电泳槽主体;3,电泳槽附件。电泳槽外壳一般使用进口的优质PC料,透明度高,耐高温,便于观察。电泳槽主体是电泳槽的核心部分,用来承载电泳凝胶,转印电泳槽报价,形成含有正负极的直流电场,从而能让样品在凝胶内分成电泳条带,终实现样品的电泳分离。电泳槽附件主要有:凝胶玻璃板、加样梳、制胶器、凝胶托盘、电泳槽导线等,从用途和样品性质来说,转印电泳槽,电泳槽主要分为:蛋白电泳槽、蛋白转印电泳槽和核酸电泳槽三大类别。
转印电泳的一抗和二抗
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一抗孵育:将LG用稀释液稀释到适当的浓,在摇床上孵育2h(如果做过预实验后发现条带较淡,转印电泳槽批发,可以适当降低一抗稀释度或者延长一抗孵育时间)
洗膜:用PBST或者TBST洗膜5 X 5min,如果预实验中发现背景过高,可以增加洗膜时间或洗膜次数
二抗孵育:二抗是辣根过氧化物酶(HRP)标记的LG, 摇床上孵育2h(如果做过预实验后发现条带较淡,可适当降低延长二抗孵育时间)
洗膜:用PBST或者TBST洗膜3 X 10min
T:Tween-20(去污剂)
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