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核酸电泳凝胶的摄影与净化处理

核酸电泳凝胶的摄影与净化处理

1.凝胶摄影

需配置分辨率较高的照相机,照相机固定架,近摄镜和红色滤光镜以及有机玻璃防护面罩。

操作需在暗室进行,蛋白电泳槽供应商,将相机固定好,把凝胶放在紫外检测仪上适当位置,调焦,装上红色滤光片,按常规拍照。

亦可使用凝胶自动处理系统,但仪器费用较高。

2.EB溶液的净化处理

由于EB具有一定的毒性,实验结束后,应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置,以避免污染环境和危害人体健康。

(1) 对于EB含量大于0.5μg/ml的溶液,可如下处理:

①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5μg/ml;

②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4 ,混匀,再加入等量的25mol/L HCl,混匀,置室温数小时;

③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH,混匀并废弃。

(2) EB含量小于0.5μg/ml的溶液可如下处理:

① 按1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时;

② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。



核酸电泳的原理

核酸电泳的原理

1.核酸分子中糖-磷酸骨架中的磷酸基团,呈负离子化状态;核酸分子在一定的电场强度的电场中,他们会向正电极方向迁移;

2.电泳中使用无反应活性的稳定的支持介质,蛋白电泳槽,电泳迁移率(或迁移速度)与分子大小、介质粘度等成反比;

因此,可在同一凝胶中、一定电场强度下分离出不用分子量大小或相同分子量但结构型有差异的核酸分子。

以上内容由北京龙方科技为您提供! 龙方电泳,伴您成功!



               核酸电泳凝胶的制备和电泳步骤

操作方法如下:

(1) 根据所需要的凝胶的大小将相应的凝胶托盘按正确位置放置在制胶器内;

(2) 称取适量琼脂糖,置电泳缓冲液中,加热使琼脂糖溶解;

(3) 待溶液冷至60℃,蛋白电泳槽公司,加入10mg/ml EB贮存液,使终浓度达0.5mg/ml;

(4) 在距离胶模底板0.5-1mm处放置电泳梳,将琼脂糖溶液倒入胶模中,蛋白电泳槽报价,厚度约3-5mm,注意避免产生气泡;

(5) 凝胶完全凝固后,移去梳子和透明胶,将凝胶放入电泳槽。
加入TBE缓冲液使恰好没过胶面约1mm;

(6) 将DNA样品与1/6体积加样缓冲液混合后,加入样品槽中;

(7) 接通电源,使样品槽在负极端,用1-5v/cm的电压,电泳适当时间;

(8) 电泳结束后,可将含EB的凝胶直接放在紫外线检测仪上观察,并拍照记录,也可将不含EB的凝胶在0.5μg/ml的EB溶液中染色30-45分钟,再如上观察和拍照,记录结果。



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