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发布时间: 2020-06-29 16:10
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蛋白电泳问题处理

蛋白电泳中经常出现的问题和解决方法

1:“微笑”(两边翘起中间凹下)形带,主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所

致,多出现于较厚的凝胶中。
    处理办法:待其充分凝固再作后续实验。

2: “皱眉”(两边向下中间鼓起)形带

主要出现在蛋白质垂直电泳槽中,一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。

处理办法:在两板间加入适量缓冲液,以排除气泡。

3:出现拖尾现象?

主要是样品融解效果不佳、样品降解或分离胶浓度过大引起的。

处理办法:加样前离心;选择适当的样品缓冲液;电泳缓冲液时间过长,重新配制

4:电泳的条带很粗?

电泳中条带很粗是常见的事,主要是未浓缩的原因。

处理办法:适当增加浓缩胶的长度;  保证浓缩  胶贮液的pH正确(6.7);适当降低电压

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DNA电泳原理

DNA电泳原理

生物大分子在一定pH条件下,通常带电荷,将其置于电场中,会以一定的速度向与其电荷性质相反的电极迁移,小型垂直电泳槽公司,迁移速度称电泳速率。

电泳速率与电场强度、分子所带的净电荷数成正比,与分子与介质的摩擦系数成反比。
摩擦系数与分子的大小、构型及介质的粘度有关。

在生理条件下,小型垂直电泳槽价格,DNA分子糖-磷酸骨架中的磷酸基团呈离子化状态,故DNA实际上呈多聚阴离子状态,在电场中向 正极方向迁移。

糖-磷酸骨架在结构上重复,故等量的双链DNA几乎带等量的净电荷。

如电场强度一定、电泳介质相同,电泳速率就取决于核酸分子的大小和构型。
构型相似的分子:分子量越大、迁移越慢。



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制胶:可以根据具体需要制作小胶、宽胶、长胶或方胶。

现分别介绍四种不同规格凝胶的制作方法。

1、小胶(6cm×6cm):每个制胶器可以灌制两块小胶,将选好的两个小凝胶托盘平行放入制胶器内,然后把您已经选好齿数(中间带缺口)的加样梳插入到制胶器的定位槽中,倒入加热过的琼脂糖胶液(注意:凝胶液体温度控制在60℃左右,加样孔靠近负极一端)。

2、宽胶(12cm×6cm):每个制胶器可以灌制一块宽胶,将选好的凝胶托盘平行放入制胶器内,然后将您选好齿数的加样梳插入到制胶器的定位槽中,倒入加热过的琼脂糖胶液(注意:凝胶液体温度控制在60℃左右,加样孔靠近负极一端)。

3、长胶(6cm×12cm):每个制胶器可以灌制一块长胶,将选好的凝胶托盘平行放入制胶器内,然后将您选好齿数的加样梳插入到制胶器的定位槽中,小型垂直电泳槽,倒入加热过的琼脂糖胶液(注意:凝胶液体温度控制在60℃左右,加样孔靠近负极一端)。

3、方胶(12cm×12cm):每个制胶架可以灌制一块方胶,将选好的凝胶托盘平行放入制胶器内,然后将您选好齿数的加样梳插入到制胶器的定位槽中,倒入加热过的琼脂糖胶液(注意:凝胶液体温度控制在60℃左右,加样孔靠近负极一端)。



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