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核酸电泳凝胶的摄影与净化处理

核酸电泳凝胶的摄影与净化处理

1.凝胶摄影

需配置分辨率较高的照相机,照相机固定架,湖北Western blot,近摄镜和红色滤光镜以及有机玻璃防护面罩。

操作需在暗室进行,将相机固定好,把凝胶放在紫外检测仪上适当位置,调焦,装上红色滤光片,按常规拍照。

亦可使用凝胶自动处理系统,但仪器费用较高。

2.EB溶液的净化处理

由于EB具有一定的毒性,实验结束后,应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置,以避免污染环境和危害人体健康。

(1) 对于EB含量大于0.5μg/ml的溶液,可如下处理:

①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5μg/ml;

②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4 ,混匀,再加入等量的25mol/L HCl,混匀,置室温数小时;

③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH,混匀并废弃。

(2) EB含量小于0.5μg/ml的溶液可如下处理:

① 按1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时;

② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。



蛋白电泳

蛋白电泳样品的浓缩效应

1:凝胶孔径的不连续性:

浓缩胶为大孔胶;分离胶为小孔胶。
在电场作用下,样品颗粒在

大孔胶中泳动的阻力小,移动速度快;当进入小孔胶时,受到的阻

力大,移动速度减慢。
因而在两层凝胶交界处,样品迁移受阻而压

缩成很窄的区带。

2: 电位梯度的不连续性:

电泳开始后,快离子的快速移动会在其后形成一个离子强度很低   的低电导区,使局部电位梯度增加,将蛋白质浓缩成狭窄的区带

大多数蛋白质在pH6.7或8.3时均带负电荷,在电场中,都向正极移动。

以上内容由北京龙方科技为您提供,希望对朋友们有所帮助!




那么哪些地方可能会导致漏胶或者漏液这种问题呢?

1. 玻璃板侧方或下方不小心因磕碰受损,这样玻璃板受损处则不再平整,液体会从这些部位漏出。
这种情况下只能更换玻璃板,而很多垂直槽的玻璃板和边条压片是粘在一起的,这种情况则需要一起更换。

有时由于清洗不到位,边条压片表面会有污物凸起,也会导致两侧不能密闭夹紧而漏胶。

2. 两侧的夹扣变松,Western blot厂商,或有些厂家的夹扣为了防止漏液,设计的很紧,时间长之后,玻璃板被挤压变形,Western blot多少钱,密封性下降。
这样玻璃板也会从两侧漏胶。

3. 底座的胶垫老化、变形或错位,玻璃板底部会发生漏胶。

4. 桌面不平整,玻璃板上夹具时不容易放正,玻璃板安装到夹具上时是相对于底座橡胶垫倾斜的,Western blot厂家,这样玻璃板底部会发生漏胶。

以上就是北京龙方科技为大家提供的相关信息,希望对大家有所帮助。
如果您想要了解更多电泳槽的知识,欢迎拨打图片上的热线联系我们。




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